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瞬时转染及稳定转染

2.1 瞬时转染及稳定转染
简介

基因的功能研究可分为loss-of-function和gain-of-function,即通过过表达该基因和抑制内源基因的表达的手段来研究某个基因的生物学功能。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。

2.1 瞬时转染

采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对基因功能进行研究与分析,且基因表达水平高,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。
2.1.1 瞬时转染—质粒
服务流程:
1.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒优化转染条件;
2.转染条件确定后,按照客户方案进行转染;
3.Q-PCR或Western Blot检测转染效率.

客户提供:
待转染细胞株及细胞培养的相关信息,待转染的质粒,目的基因信息,目的蛋白抗体。

我们提供:
细胞培养及转染试剂,带有绿色荧光的细胞照片,实验原始数据,实验方法和结果报告单。

质量保证:
至少30%的转染效率。

2.1.2 瞬时转染——siRNA
由于小分子的转染效率较高,使基因功能研究中的loss-of-function手段十分有效。

服务流程:
1.根据基因序列,设计并合成siRNA;
2.进行预实验,通过转染带有荧光标记的阴性对照siRNA优化转染条件;
3.通过qPCR和Western Blot等方法验证siRNA的沉默效率,筛选出siRNA最佳使用浓度;
4.转染条件确定后,按照客户方案进行转染;
5.进行后续检测实验。

客户提供:
待转染细胞株及细胞培养的相关信息,目的基因信息,目的蛋白抗体。
我们提供:
siRNA的设计和合成,细胞培养及转染试剂,带有绿色荧光的细胞照片,实验原始数据,实验方法和结果报告单。

质量保证:
在确保细胞的转染效率比较理想的情况下,Real-time PCR检测,siRNA的沉默效果达到70%以上。

2.1.3 瞬时转染——microRNA
采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对miRNAs功能进行研究与分析,而且由于小分子的转染效率较高,对于gain-of-function的研究十分有效,但缺点是小分子在细胞内持续发挥作用的时间较短,对于较长时间才能出现的表型则需要反复转染miRNAs分子。

服务流程:
1.待研究microRNA订购;
2.预测被调控基因引物设计及合成;
3.进行预实验microRNA转染条件优化,通过qPCR检测转染后microRNA在细胞内的水平,筛选出microRNA最佳使用浓度;
4.转染条件确定后,按照客户方案进行转染;
5.进行后续Q-PCR、Western Blot或sensor reporter等检测实验。

客户提供:
待转染细胞株,待转染的microRNA,预测被调控基因的抗体。

我们提供:
microRNA订购,细胞培养及转染试剂,实验原始数据,实验方法和结果报告单。

质量保证:
转染前后细胞内microRNA水平具有统计学意义上的显著差异。

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