020-28069208  13699728147

当前位置:首页  > 产品中心 > RNA功能解决方案服务

产品中心

凝胶迁移实验-EMSA
凝胶迁移实验-EMSA
概述:

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析,这以技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

原理:
通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针,常见EMSA实验设计一般分以下三种:
野生型冷探针竞争:野生型冷探针与热探针竞争结合核抽提,从而证明复合物是探针和核蛋白的特异结合产物。
突变型冷探针竞争:将探针上的转录因子结合的核心序列突变后,再与野生热探针和核抽提物孵育,该结果可以证明复合物的形成取决于核心序列。
Supershift实验:在反应中加入预测转录因子的抗体,由于抗原抗体特异结合,使复合物分子量增大,出现超迁移条带,该结果可以证明复合物中时候含有预测的转录因子。

采用 EMSA 可以直接验证:

•转录因子与miRNAs启动子的结合(蛋白:DNA复合体);合体),并调控miRNAs的成熟过程。
EMSA 的特殊作用:
•EMSA:Western Blot替代Supershift检测结合蛋白的种类;
•设置不同的探针来判断miRNAs与蛋白的结合序列。

客户提供:
目的基因信息,生物素标记探针

我司提供:
EMSA结果图
上一产品:miRNA靶基因验证-luciferase报告基因
下一产品:石蜡组织microRNA表达检测