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慢病毒包装
  慢病毒载体(Lentiviral vector)较逆转录病毒载体有更广的宿主范围,慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达siRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达siRNA/miRNA,实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默,为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能,以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。慢病毒作为siRNA/miRNA的携带者,不但具备特异性地使基因表达沉默的能力,而且充分发挥了慢病毒载体自身所具备的优势,为基因功能的研究提供了更强有力的工具。


服务优势:
1.高效的转染:包装的病毒系统可侵染最多的细胞类型,包括非分化细胞和难以转染细胞(原代、血、干细胞)或侵染转基因鼠模型;
2.表达稳定,可遗传:包装基因整合到基因组DNA上,高水平表达,低变异;
3.不干扰细胞: 细胞功能不受侵染过程影响;
4.高包装效率:病毒包装时采用SBI提供系统质粒转染效率接近100%。

服务内容:
慢病毒构建的siRNA/miRNA载体可以扩增替代瞬时表达载体使用;
lentivirus-siRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,可进行长时间的稳定表达。

服务流程:
1.含目的基因的慢病毒载体的构建和纯化提取;
2.慢病毒表达载体PLVX,骨架质粒PLD2、PLD3,在脂质体LP2000作用下,三质粒共转染293T细胞;
3.培养48~72h,收集培养上清;
4.病毒的纯化和浓缩(超离和/或超滤);
5.滴度测定、目的基因检定;
6.将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达。

客户提供:
所要表达的外源基因名称或序列和所要选择的穿梭载体。

我们提供:
提供重组后的慢病毒载体质粒(4μg),并附上重组成功的酶切鉴定结果及对目的基因的PCR鉴定结果。
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